Kit DNA tinja

Kit ini memanfaatkan sifat adsorpsi asam nukleat reversibel pada membran serat kaca, dapat dengan cepat dan andal mengisolasi DNA genom utuh berkualitas tinggi dari sampel tinja segar atau beku 100-200 mg. Dikombinasikan dengan sistem buffer lisis yang unik, secara efektif dapat menghilangkan asam humat, polisakarida, senyawa fenolik, dan penghambat enzim dalam sampel tinja. DNA yang dimurnikan cocok untuk teknik biologi molekuler hilir seperti PCR, pencernaan enzim, dan hibridisasi.

Proteinase K dan RNase A diangkut dalam kantong es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat ; Reagen lainnya diangkut pada suhu kamar, disimpan pada suhu kamar, berlaku selama 12 bulan.

1. Harap siapkan penangas air atau blok pemanas 70 derajat terlebih dahulu.

2. Jika reagen mengendap, larutkan pada suhu 37 derajat, dan gunakan setelah kembali ke suhu kamar.

3. Sebelum digunakan, tambahkan 30 mL isopropil alkohol ke dalam Buffer SGB, tambahkan 18 mL etanol anhidrat ke dalam Buffer SGD, dan tambahkan 49 mL etanol anhidrat ke dalam Buffer PW.

1. Timbang 100-200 mg sampel tinja ke dalam tabung sentrifugasi 2 mL dan letakkan tabung tersebut di atas es (Jika sampel berbentuk cair, masukkan 200 µL ke dalam tabung sentrifugasi);

2. Tambahkan 600 μL Buffer SLA, 15 μL Proteinase K dan 0,25 g butiran gerinda (1 mm) ke dalam tabung sentrifugal. Merekomendasikan penggunaan penggiling tisu (KZ-III-F) untuk menggiling (60 Hz, 4 derajat, jalankan 30 detik, jeda 10 detik, menggiling 5 kali) hingga homogen, atau gunakan instrumen pusaran untuk mengocok sebentar-sebentar selama 1 menit;

3. Inkubasi pada suhu 70 derajat selama 15 menit. Vortex sampel 2-3 kali selama inkubasi (Jika DNA diisolasi dari bakteri gram positif, suhu inkubasi dapat ditingkatkan hingga 95 derajat );

4. Sentrifugasi pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm (~13,400×g) selama 10 menit, pipetkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL yang baru, berhati-hatilah agar tidak mengaspirasi endapan;

5. Tambahkan 10 μL RNase A ke dalam supernatan yang diperoleh pada langkah sebelumnya, campur sampel secara menyeluruh dengan cara voretxing, inkubasi pada suhu kamar selama 5 menit, kemudian tambahkan 0,3 kali volume supernatan Buffer SLB ke dalam tabung centrifuge , campur sampel secara menyeluruh dengan voretxing dan penangas es selama 5 menit;

6. Centrifuge pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm (~13,400×g) selama 5 menit, pipetkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL yang baru, berhati-hatilah agar tidak mengaspirasi endapan;

7. Tambahkan Buffer SGB dengan volume yang sama ke dalam tabung centrifuge (pastikan isopropil alkohol telah ditambahkan sebelum digunakan), dan gunakan pipet untuk meniup dan aduk rata (dapat terjadi pengendapan);

8. Pindahkan semua campuran dari langkah sebelumnya ke dalam DNA Spin Column (jumlah setiap penambahan tidak boleh melebihi 600 µL, jika lebih dari 600 µL dapat ditambahkan secara batch), sentrifugasi pada suhu kamar pada suhu 12,{{4} } rpm (~13.400×g) selama 1 menit. Buang filtratnya dan masukkan DNA Spin Column ke dalam tabung pengumpul;

9. Tambahkan 500 μL Buffer SGD (pastikan etanol anhidrat telah ditambahkan sebelum digunakan) ke dalam DNA Spin Column, sentrifugasi pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm (~13,400 ×g) selama 1 menit. Buang filtratnya dan masukkan DNA Spin Column ke dalam tabung Pengumpul;

10. Tambahkan 600 μL Buffer PW ke dalam DNA Spin Column (pastikan telah ditambahkan etanol anhidrat sebelum digunakan, tambahkan Buffer PW di sepanjang dinding tabung untuk membantu membuang sisa garam dari dinding), dan sentrifugasi pada suhu kamar pada 12 ,000 rpm (~13.400×g) selama 1 menit. Buang filtratnya dan masukkan DNA Spin Column ke dalam tabung pengumpul;

11. Ulangi langkah 10;

12. Ubah posisi DNA Spin Column ke dalam tabung Pengumpul, sentrifugasi pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm (~13,400×g) selama 2 menit, keluarkan DNA Spin Column dan letakkan pada centrifuge 1,5 mL yang baru tabung;

13. Buka penutup DNA Spin Column dan letakkan pada suhu kamar selama 3-5 menit agar sisa etanol menguap sepenuhnya;

14. Tambahkan 50-100 μL Buffer TE atau Air Bebas Nuklease ke tengah membran dan letakkan pada suhu kamar selama 2 menit. Centrifuge pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit dan kumpulkan larutan DNA. Jika Anda memerlukan konsentrasi DNA yang lebih tinggi, larutan yang diperoleh dapat ditambahkan kembali ke DNA Spin Column, letakkan pada suhu kamar selama 2 menit dan sentrifugasi pada suhu kamar dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit, elusi DNA lagi .

1. Sebelum pengoperasian, pastikan untuk membaca manual produk ini dengan cermat.

2. Kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai selama pengoperasian.

3. Jika sampel tinja kering, tambahkan jumlah Buffer SLA menjadi 1 mL, atau kurangi berat sampel, terbalik beberapa kali dan diamkan pada suhu kamar selama 3-5 menit setelah menambahkan Buffer SLA, jika tidak hasil DNA akan terpengaruh.

4. Jika memerlukan inkubasi 95 derajat, silakan buka tutup tabung centrifuge satu kali ketika suhu mencapai 95 derajat, keluarkan gas dalam tabung centrifuge, lalu tutup rapat tabung centrifuge untuk mencegah gas dalam tabung centrifuge mengembang dan memecahkan tutupnya, mengakibatkan percikan sampel tinja.

5. Beberapa reagen mudah menguap atau teroksidasi, paparan udara yang lama harus dihindari, reagen harus ditutup tepat waktu setelah digunakan.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: kit DNA bangku, produsen, pemasok, pabrik kit DNA bangku