Kit Ekstraksi RNA Tanaman

Kit ini menggunakan kolom gel silika untuk mengekstrak RNA dengan kemurnian tinggi dan integritas tinggi dengan mudah dan cepat dari sampel jaringan tanaman sederhana 50-100 mg (seperti gandum, daun jagung, dll.). Sistem penyangga produk ini dapat secara efektif melisiskan sampel jaringan tanaman dan menghilangkan banyak metabolit sekunder dalam sampel. RNA dengan kemurnian tinggi yang diekstraksi dapat langsung digunakan dalam berbagai eksperimen biologi molekuler seperti hibridisasi utara, hibridisasi spot, pemurnian mRNA, terjemahan in vitro, RT-PCR, RT-qPCR, konstruksi perpustakaan cDNA, dll.

DNase, Solusi DTT diangkut dalam es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat ; Reagen yang tersisa diangkut dan disimpan pada suhu kamar; Tanggal kadaluarsanya adalah 12 bulan.

1. Jika Buffer PRL1 mengendap, harap panaskan pada suhu 37 derajat dan gunakan saat dikembalikan ke suhu kamar.

2. Sebelum digunakan, tambahkan Larutan DTT ke dalam Buffer PRL3 hingga konsentrasi akhir 4%, yaitu tambahkan 40 µL Larutan DTT ke dalam 1 mL Buffer PRL3. Lisat ini paling baik dibuat segar, Buffer PRL3 yang ditambahkan ke Larutan DTT dapat disimpan pada suhu 4 derajat selama satu bulan.

3. Sebelum digunakan, tambahkan 12 mL etanol absolut ke dalam Buffer ATMR dan 80 mL etanol absolut ke dalam Buffer RWB.

4. Saat menggiling dengan penggiling, dinginkan penggiling terlebih dahulu.

1. Lisis jaringan tumbuhan:

Pindahkan {{0}} mg jaringan tanaman segar atau kriopreservasi ke dalam tabung penggilingan bebas nuklease 2,0 mL (direkomendasikan HT-200-M) yang berisi manik-manik zirkonia 3-4 3 mm (direkomendasikan G{{6 }}G) dan didinginkan terlebih dahulu dengan nitrogen cair. Tempatkan tabung gerinda pada penggiling (direkomendasikan KZ-5F-3D) (dinginkan adaptor dengan cepat dalam nitrogen cair sebelum memasang tabung gerinda. Prosedur penggilingan yang disarankan: atur frekuensi ke 60 HZ, suhu ke 4 derajat, giling selama 30 detik setiap kali, ulangi prosesnya sebanyak 4 kali, dengan interval 5 detik di antara setiap gilingan) dan giling hingga benar-benar menjadi bubuk (Jika jaringan tidak sepenuhnya digiling menjadi bubuk, itu akan mempengaruhi hasil dan kualitas RNA. Waktu penggilingan dapat diperpanjang hingga jaringan benar-benar digiling). Setelah penggilingan selesai, tambahkan 500 μL Buffer PRL1 ke dalam tabung penggilingan, campur isinya secara terbalik dan inkubasi pada suhu 56 derajat selama 15 menit, aduk terbalik setiap 5 menit.

2. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 5 menit pada suhu kamar, pindahkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL yang baru. Tambahkan 1/5 volume supernatan Buffer PRL2, terbalik seluruhnya dan aduk rata.

3. Centrifuge pada 12,000 rpm selama 5 menit pada suhu 4 derajat , pindahkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 2.0 mL yang baru. Tambahkan 500 μL Buffer PRL3 ke dalam supernatan (pastikan telah menambahkan Larutan DTT sebelum digunakan), terbalik seluruhnya dan aduk rata.

4. Tambahkan 1/2 volume etanol ke dalam campuran langkah sebelumnya, terbalik seluruhnya dan aduk rata.

5. Pindahkan campuran ke RNA Spin Column. Setiap penambahan tidak melebihi 600 μL, jika melebihi dapat ditambahkan secara batch.

6. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, dan buang filtratnya. Masukkan kembali Kolom Putar RNA ke dalam Tabung Pengumpul.

7. Tambahkan 500 μL Buffer ATMR ke dalam RNA Spin Column, dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, lalu buang filtratnya.

8. Tambahkan 600 μL Buffer RWB ke RNA Spin Column (tambahkan Buffer RWB disepanjang dinding pipa untuk membantu membilas sisa garam pada dinding pipa), dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, lalu buang filtratnya.

9. Pencernaan DNase:

a) pembuatan larutan reaksi DNase: Campurkan 5 μL 10 × DNase Buffer, 5 μL DNase, 40 μL Air Bebas Nuklease dalam tabung sentrifugasi bebas Nuklease 1,5 mL yang baru;

b) tambahkan 50 μL larutan reaksi DNase ke tengah Kolom Putar RNA, dan diamkan pada suhu kamar selama 15 menit;

c) tambahkan 500 μL Buffer RWB ke dalam RNA Spin Column, dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 30 detik pada suhu kamar, lalu buang filtratnya. Masukkan kembali kolom RNA Spin ke dalam tabung pengumpul.

10. Ulangi langkah 8.

11. Masukkan RNA Spin Column ke dalam tabung pengumpul, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk menghilangkan sisa cairan.

12. Pindahkan RNA Spin Column ke dalam tabung sentrifus bebas nuklease 1,5 mL yang baru, diamkan pada suhu kamar selama 3~5 menit, sehingga sisa etanol RNA Spin Column dapat menguap seluruhnya.

13. Tambahkan 50-100 μL Air Bebas Nuklease ke tengah Kolom Putar RNA, diamkan pada suhu kamar selama 5 menit. Centrifuge pada 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk mengumpulkan RNA. Untuk mendapatkan konsentrasi RNA yang lebih tinggi, Anda juga dapat menambahkan kembali eluen pertama ke Kolom Putar RNA, lalu diamkan pada suhu kamar selama 5 menit dan sentrifugasi pada kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk mengumpulkan RNA kembali .

1. Harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai saat mengoperasikan.

2. Gunakan produk dan tip plastik bebas RNase untuk menghindari kontaminasi silang.

3. Gunakan bangku tes khusus dan peralatan elektroforesis untuk pengoperasian RNA, dan kenakan masker selama pengoperasian untuk mencegah peralatan dan reagen yang digunakan menjadi polusi RNase.

4. Jika sampel tanaman dikumpulkan di luar laboratorium, sampel tersebut harus ditempatkan dalam nitrogen cair agar tidak mempengaruhi hasil dan kualitas RNA.

Hasil RNA yang diekstraksi dari berbagai sampel tanaman dan jamur dengan kit ini ditunjukkan pada tabel di bawah. Hasil RNA terkait dengan spesies tanaman, organ, kesegaran dan status pertumbuhan. Tabel berikut hanya untuk referensi.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: kit ekstraksi rna tanaman, produsen, pemasok, pabrik kit ekstraksi rna tanaman Cina