Kit RNA Tanaman Untuk Polisakarida & Polifenol

 

Nama Produk	Kucing.Tidak.	Spesifikasi.
Kit RNA Tanaman Untuk Polisakarida & Polifenol	G3641-50T	50T

 

 

Kit ini dapat mengekstraksi RNA dari berbagai sampel jaringan tanaman (seperti daun, biji, buah, dll.) yang kaya akan polisakarida dan polifenol dengan menggunakan sistem buffer lisis khusus yang dikombinasikan dengan metode pemurnian membran gel silika. Kit ini dapat secara efektif menghilangkan polisakarida, polifenol, protein, fragmen sel, dan kotoran lainnya dalam sampel jaringan tanaman, dan dapat memurnikan hingga puluhan mikrogram RNA dengan kemurnian tinggi dan integritas tinggi dari 20-200 mg sampel jaringan tanaman dalam satu jam. Tidak diperlukan reagen organik seperti fenol dan kloroform. RNA dengan kemurnian tinggi yang diekstraksi dapat langsung digunakan dalam berbagai eksperimen biologi molekuler seperti hibridisasi utara, hibridisasi spot, pemurnian mRNA, terjemahan in vitro, RT-PCR, RT-qPCR, konstruksi perpustakaan cDNA, dll.

 

 

DNase, Solusi DTT diangkut dalam es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat ; Reagen yang tersisa diangkut dan disimpan pada suhu kamar; Tanggal kadaluarsanya adalah 12 bulan.

 

 

Nomor Komponen	Komponen	G3641-50T
G3641-1	Penyangga PRL1	30 ml
G3641-2	Penyangga PRL2	8 ml
G3641-3	Penyangga PRL3	30 ml
G3641-4	Penyangga ATMR	18ml
G3641-5	Penyangga RWB	20 ml
G3641-6	Solusi DTT	1,2 ml
G3641-7	DNase	250 μL
G3641-8	Penyangga DNase 10×	500 μL
G3641-9	Air Bebas Nuklir	10 ml
G3641-10	Kolom Putar RNA (dengan Tabung Pengumpul)	50 set
petunjuk		Satu salinan

 

 

1. Jika Buffer PRL1 mengendap, harap panaskan pada suhu 37 derajat dan gunakan saat dikembalikan ke suhu kamar.

2. Sebelum digunakan, tambahkan Larutan DTT ke dalam Buffer PRL3 hingga konsentrasi akhir 4%, yaitu tambahkan 40 µL Larutan DTT ke dalam 1 mL Buffer PRL3. Lisat ini paling baik dibuat segar, Buffer PRL3 yang ditambahkan ke Larutan DTT dapat disimpan pada suhu 4 derajat selama satu bulan.

3. Sebelum digunakan, tambahkan 12 mL etanol absolut ke dalam Buffer ATMR dan 80 mL etanol absolut ke dalam Buffer RWB.

4. Saat menggiling dengan penggiling, dinginkan penggiling terlebih dahulu.

 

 

1. Lisis jaringan tumbuhan:

A. Untuk daun tanaman, volume pengambilan sampel yang disarankan adalah {{0}} mg. Pindahkan jaringan tanaman segar atau kriopreservasi ke dalam tabung penggilingan bebas nuklease 2,0 mL (direkomendasikan HT-200-M) yang berisi butiran zirkonia berukuran 3-4 3 mm (direkomendasikan G0203-150G) dan didinginkan terlebih dahulu dengan cairan nitrogen. Tempatkan tabung gerinda pada penggiling (direkomendasikan KZ-5F-3D) (dinginkan adaptor dengan cepat dalam nitrogen cair sebelum memasang tabung gerinda. Prosedur penggilingan yang disarankan: atur frekuensi ke 60 HZ, suhu ke 4 derajat, giling selama 30 detik setiap kali, ulangi prosesnya sebanyak 4 kali, dengan interval 5 detik di antara setiap gilingan) dan giling hingga benar-benar menjadi bubuk (Jika jaringan tidak sepenuhnya digiling menjadi bubuk, itu akan mempengaruhi hasil dan kualitas RNA. Waktu penggilingan dapat diperpanjang hingga jaringan benar-benar digiling). Setelah penggilingan selesai, tambahkan 500 μL Buffer PRL1 ke dalam tabung penggilingan, campur isinya secara terbalik dan inkubasi pada suhu 56 derajat selama 15 menit, aduk terbalik setiap 5 menit.

B. Untuk benih tanaman, volume pengambilan sampel yang disarankan adalah {{0}} mg, dan 100-200 mg untuk buah-buahan. Tambahkan 500 μL Buffer PRL1 ke dalam 2,0 mL tabung gerinda bebas nuklease (disarankan HT-200-M) terlebih dahulu, lalu tambahkan manik-manik baja 3-4 4 mm (disarankan G{{9 }}G). Pindahkan jaringan tanaman segar atau kriopreservasi ke dalam tabung penggilingan bebas nuklease 2,0 mL. Tempatkan tabung penggilingan pada penggiling (disarankan KZ-5F-3D) (Prosedur penggilingan yang disarankan: atur frekuensi ke 70 HZ, suhu ke 4 derajat, giling selama 30 detik setiap kali, ulangi prosesnya 20-30 kali, dengan interval 5 detik antara masing-masing penggilingan) dan giling hingga benar-benar hingga homogen (Jika jaringan tidak sepenuhnya digiling untuk dihomogenisasi, maka akan mempengaruhi hasil dan kualitas RNA. Waktu penggilingan dapat diperpanjang hingga jaringan benar-benar digiling). Setelah penggilingan selesai, inkubasi pada suhu 56 derajat selama 15 menit, aduk terbalik setiap 5 menit.

2. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 5 menit pada suhu kamar, pindahkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL yang baru. Tambahkan 1/5 volume supernatan Buffer PRL2, terbalik seluruhnya dan aduk rata.

3. Centrifuge pada 12,000 rpm selama 5 menit pada suhu 4 derajat , pindahkan supernatan ke dalam tabung centrifuge 2.0 mL yang baru. Tambahkan 500 μL Buffer PRL3 ke dalam supernatan (pastikan telah menambahkan Larutan DTT sebelum digunakan), terbalik seluruhnya dan aduk rata.

4. Tambahkan 1/2 volume isopropanol ke dalam campuran dari langkah sebelumnya, terbalik sepenuhnya dan aduk rata.

5. Pindahkan campuran ke RNA Spin Column. Setiap penambahan tidak melebihi 600 μL, jika melebihi dapat ditambahkan secara batch.

6. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, dan buang filtratnya. Masukkan kembali Kolom Putar RNA ke dalam Tabung Pengumpul.

7. Tambahkan 500 μL Buffer ATMR ke dalam RNA Spin Column, dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, lalu buang filtratnya.

8. Tambahkan 600 μL Buffer RWB ke RNA Spin Column (tambahkan Buffer RWB disepanjang dinding pipa untuk membantu membilas sisa garam pada dinding pipa), dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, lalu buang filtratnya.

9. Pencernaan DNase:

a) pembuatan larutan reaksi DNase: Campurkan 5 μL 10 × DNase Buffer, 5 μL DNase, 40 μL Air Bebas Nuklease dalam tabung sentrifugasi bebas Nuklease 1,5 mL yang baru;

b) tambahkan 50 μL larutan reaksi DNase ke tengah Kolom Putar RNA, dan diamkan pada suhu kamar selama 15 menit;

c) tambahkan 500 μL Buffer RWB ke dalam RNA Spin Column, dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 30 detik pada suhu kamar, lalu buang filtratnya. Masukkan kembali kolom RNA Spin ke dalam tabung pengumpul.

10. Ulangi langkah 8.

11. Masukkan RNA Spin Column ke dalam tabung pengumpul, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk menghilangkan sisa cairan.

12. Pindahkan RNA Spin Column ke dalam tabung sentrifus bebas nuklease 1,5 mL yang baru, diamkan pada suhu kamar selama 3~5 menit, sehingga sisa etanol RNA Spin Column dapat menguap seluruhnya.

13. Tambahkan 50-100 μL Air Bebas Nuklease ke tengah Kolom Putar RNA, diamkan pada suhu kamar selama 5 menit. Centrifuge pada 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk mengumpulkan RNA. Untuk mendapatkan konsentrasi RNA yang lebih tinggi, Anda juga dapat menambahkan kembali eluen pertama ke Kolom Putar RNA, lalu diamkan pada suhu kamar selama 5 menit dan sentrifugasi pada kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar untuk mengumpulkan RNA kembali .

 

 

1. Harap kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai saat mengoperasikan.

2. Gunakan produk dan tip plastik bebas RNase untuk menghindari kontaminasi silang.

3. Gunakan bangku tes khusus dan peralatan elektroforesis untuk pengoperasian RNA, dan kenakan masker selama pengoperasian untuk mencegah peralatan dan reagen yang digunakan menjadi polusi RNase.

4. Jika sampel tanaman dikumpulkan di luar laboratorium, sampel tersebut harus ditempatkan dalam nitrogen cair agar tidak mempengaruhi hasil dan kualitas RNA.

5. Untuk sampel dengan kadar air lebih banyak, ukuran sampel awal dapat ditingkatkan secara tepat.

 

 

Hasil RNA yang diekstraksi dari berbagai sampel tanaman dan jamur dengan kit ini ditunjukkan pada tabel di bawah. Hasil RNA terkait dengan spesies tanaman, organ, kesegaran dan status pertumbuhan. Tabel berikut hanya untuk referensi.

 

Jenis sampel	Nama sampel	Hasil RNA
Daun	Gossypium hirsutum	40-45ug/80mg
	Rosa chinensis	50-60ug/50 mg
	Pinus	5-8ug/50 mg
	Bryophyllum pinnatum	5-8ug/150 mg
Benih	Arachis hipogaea	15-20ug/50 mg
	Triticum aestivum	5-8ug/50 mg
	Brassica napus	ug/20 mg
	Gossypium hirsutum	ug/20 mg
Buah	Lycopersicon esculentum	20-25ug/150 mg
Umbi	Solanum tuberosum	10-13ug/200 mg

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: kit rna tanaman untuk polisakarida & polifenol, kit rna tanaman Cina untuk produsen, pemasok, pabrik polisakarida & polifenol