Kit Ekstraksi RNA FFPE

 

Nama Produk	Kucing.Tidak.	Spesifikasi.
Kit Ekstraksi RNA FFPE	G3642-50T	50 T

 

 

Kit ini cocok untuk ekstraksi RNA dari jaringan tetap formalin dan jaringan tertanam parafin (FFPE), menggunakan reagen dewaxing khusus, tanpa xilena dan pelarut organik lainnya, aman dan tidak beracun, dapat secara efektif menghilangkan parafin dan melepaskan sampel jaringan. Kit ini dapat melisiskan jaringan secara efisien dengan menggunakan buffer lisis khusus, dan RNA dari jaringan yang tertanam parafin dapat diekstraksi dengan cepat dan efektif dengan metode kolom sentrifugasi. Proses ekstraksi dapat diselesaikan dalam waktu 1 jam, dan RNA memiliki hasil yang tinggi, kemurnian dan integritas yang tinggi, sehingga cocok untuk eksperimen biologi molekuler hilir seperti RT-PCR dan PCR Real-Time.

 

 

DNase dan Proteinase K dikirimkan dengan es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat . Reagen lainnya dikirim dan disimpan pada suhu kamar; berlaku selama 12 bulan.

 

 

Nomor Komponen	Komponen	G3642-50T
G3642-1	penyangga DP	30 ml
G3642-2	penyangga CRL	10 ml
G3642-3	Proteinase K	1 ml
G3642-4	Penyangga FRB	10 ml
G3642-5	DNase	500 μL
G3642-6	Buffer Reaksi 10×DNase	500 μL
G3642-7	Penyangga RW1	30 ml
G3642-8	Penyangga RW2	16 mL (64 mL etanol anhidrat ditambahkan sebelum digunakan)
G3642-9	Air Bebas Nuklir	10 ml
G3642-10	Kolom Putar RNA	50 set
petunjuk		Satu salinan

 

 

1. Siapkan blok pemanas pada suhu 80 derajat dan 55 derajat terlebih dahulu.

2. Jika Buffer CRL dan Buffer FRB mengendap, panaskan pada suhu 65 derajat hingga larut dan gunakan kembali ke suhu kamar.

3. Siapkan hanya sebagian larutan kerja DNase yang diperlukan untuk percobaan.

4. Tambahkan 64 mL etanol anhidrat ke dalam Buffer RW2 sebelum digunakan pertama kali, aduk rata lalu gunakan.

 

 

1. Persiapan sampel:

A. Bagian parafin: kikis 5~8 bagian parafin (tebal 5~10 μm, ukuran 1×1 cm2). Jika sampel terkena udara, 2~3 bagian di permukaan akan dibuang.

B. Blok parafin: kikis sampel jaringan sekitar 30 mg dengan pisau bedah yang disterilkan, buang sisa parafin sebanyak mungkin dan potong sampel.

C. Jaringan sampel direndam dalam formalin: keringkan cairan pada permukaan sampel dengan kertas saring, ambil sampel sekitar 30 mg, potong-potong dan masukkan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL, tambahkan 500 μL 1×PBS buffer (pH 7,4), osilasi pusaran untuk 10 detik, lalu sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, buang supernatannya, ulangi sebanyak 3 kali.

2. Pindahkan sampel ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL, tambahkan 500 μL Buffer DP, inkubasi pada suhu 80 derajat selama 3 menit, dan osilasi pusaran selama 10 detik saat sampel masih panas.

3. Tambahkan 200 μL Buffer CRL ke dalam tabung centrifuge, aduk rata dengan vorteks, centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, dan bentuk dua lapisan larutan (lapisan atas adalah fase minyak, lapisan bawah adalah fase minyak. fase air).

4. Tambahkan 20 μL Proteinase K ke fase air bawah, aduk perlahan dengan pipet (usahakan jangan sampai merusak stratifikasi), inkubasi pada suhu 55 derajat selama 15 menit.

5. Kemudian pindahkan tabung centrifuge ke blok pemanas 80 derajat, inkubasi selama 15 menit (jika hanya ada satu blok pemanas, letakkan tabung centrifuge yang berisi sampel pada suhu kamar terlebih dahulu, kemudian masukkan tabung centrifuge ke dalam blok pemanas ketika suhu mencapai 80 derajat), aduk terbalik.

6. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 5 menit pada suhu kamar, dan bentuk dua lapisan larutan (lapisan atas adalah fase minyak, lapisan bawah adalah fase air).

7. Pindahkan larutan berair dari lapisan bawah ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL bebas Nuklease yang baru (jangan sampai larutan fase minyak atas dan kotoran lainnya). Tambahkan Buffer FRB dengan volume fase air yang sama dan etanol anhidrat dengan volume fase air 3 kali lipat (mungkin ada pengendapan), dan gunakan pipet cair untuk meniup dan aduk rata.

8. Pindahkan seluruh campuran ke RNA Spin Column, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar, dan buang filtratnya.

9. Siapkan larutan kerja DNase: ambil 35 μL Air Bebas Nuklease, 5 μL 10×DNase Reaction Buffer dan 10 μL DNase dalam tabung centrifuge bebas Nuklease yang baru, aduk perlahan dengan pipet.

10. Tambahkan tetesan larutan kerja DNase ke tengah membran Kolom Putar RNA dan diamkan pada suhu kamar selama 15 menit.

11. Tambahkan 500 μL Buffer RW1 ke RNA Spin Column, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, dan buang filtratnya.

12. Tambahkan 600 μL Buffer RW2 ke RNA Spin Column (tambahkan Buffer RW2 di sepanjang dinding pipa untuk membantu membilas sisa garam pada dinding pipa), sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, dan buang filtratnya.

13. Ulangi langkah 12.

14. Tempatkan RNA Spin Column pada tabung pengumpul dan sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar. Keluarkan RNA Spin Column dan masukkan ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL bebas Nuklease yang baru.

15. Buka tutup RNA Spin Column, diamkan pada suhu ruang selama 3~5 menit agar etanol menguap sempurna.

16. Tambahkan 50~100 μL Air Bebas Nuklease ke tengah membran Kolom Putar RNA, diamkan pada suhu kamar selama 5 menit, sentrifugasi pada kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit untuk mengumpulkan larutan RNA. Untuk mendapatkan konsentrasi RNA yang lebih tinggi, Anda juga dapat menambahkan kembali eluen pertama ke Kolom Putar RNA, kemudian didiamkan pada suhu kamar selama 5 menit dan disentrifugasi selama 2 menit untuk mengelusi RNA kembali.

 

 

1. Harap baca Manual Produk dengan seksama sebelum digunakan.

2. Hasil dan integritas RNA yang diekstraksi dengan kit ini bergantung pada jenis sampel, waktu tetap, kondisi tetap, dan waktu penyimpanan sampel. Waktu tetap sebaiknya dalam 8 ~ 24 jam. Jika waktu tetap sampel lebih dari 24 jam atau waktu penyimpanan lebih dari 1 tahun, hal ini dapat menyebabkan degradasi RNA dalam jumlah besar.

3. Sampel harus benar-benar dehidrasi sebelum ditanam untuk mencegah sisa formalin mempengaruhi percobaan selanjutnya.

4. Saat mengambil sampel jaringan yang tertanam, kita harus menghilangkan kelebihan parafin dan memotong sampel sebanyak mungkin, dan jumlah pengambilan sampel tidak boleh melebihi 30 mg, jika tidak maka akan mudah menyebabkan lisis yang tidak mencukupi dan mempengaruhi hasil asam nukleat.

5. Asam nukleat yang dimurnikan dari sampel FFPE tidak direkomendasikan untuk aplikasi hilir yang memerlukan RNA ukuran penuh.

6. Kenakan pakaian lab, sarung tangan sekali pakai, dan masker selama percobaan, hindari berbicara, dan gunakan ujung pipet dan tabung sentrifugasi bebas nuklir untuk menghindari kontaminasi silang.

7. Bangku uji operasi khusus ekstraksi RNA dan peralatan elektroforesis harus digunakan.

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: kit ekstraksi ffpe rna, produsen, pemasok, pabrik kit ekstraksi ffpe rna Cina