2×Campuran Master QPCR Probe Multipleks Biru Universal (dengan UDG)

 

Nama Produk	Kucing.Tidak.	Spesifikasi.
2×Universal Blue Multiplex Probe qPCR Master Mix (dengan UDG)	G3348-01	1 ml
	G3348-05	5×1 mL
	G3348-15	15×1 mL

 

 

Produk ini adalah campuran awal PCR kuantitatif fluoresensi universal 2× berdasarkan metode penyelidikan, setelah optimalisasi khusus sistem reaksi PCR kuantitatif fluoresensi ganda, hingga reaksi PCR kuantitatif fluoresensi empat kali lipat dalam tabung reaksi yang sama. Pada saat yang sama, produk tersebut mengandung pewarna koreksi unik, yang kompatibel dengan semua peralatan qPCR, dan tidak perlu menyesuaikan konsentrasi ROX pada instrumen yang berbeda. Pewarna biru ditambahkan ke premix untuk berfungsi sebagai indikator saat menambahkan sampel ke pelat reaksi bening. Selain itu, produk ini juga mengandung Uracil-DNA Glycosylase (UDG) dan jumlah penambahan dUTP yang dioptimalkan secara khusus, yang dapat mencegah kontaminasi silang pada kontaminasi sisa template produk dan meningkatkan spesifisitas, sensitivitas, dan akurasi produk.

 

 

Dikirim dengan es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat ; berlaku hingga 12 bulan.

 

 

Nomor Komponen	Komponen	G3348-01	G3348-05	G3348-15
G3348-01	2×Universal Blue Multiplex Probe qPCR Master Mix (dengan UDG)	1 ml	5×1 mL	15×1 mL
petunjuk		Satu salinan

 

 

1. Diperlukan instrumen PCR kuantitatif fluoresensi waktu nyata.

2. Tabung reaksi qPCR khusus atau pelat reaksi untuk percobaan diperlukan tetapi tidak disertakan dalam kit ini.

3. Primer dan probe QPCR (primer referensi dan prinsip desain probe) diperlukan tetapi tidak disertakan dalam kit ini.

 

 

1. Merekomendasikan sistem reaksi PCR:

Komponen	20 μL rxn	Konsentrasi Akhir
2×Universal Blue Multiplex Probe qPCR Master Mix (dengan UDG)	10 μL	1×
Primer Maju (10 μM)a	Variabel	0.1-0.5 μM
Primer Terbalik (10 μM)a	Variabel	0.1-0.5 μM
Penyelidikan (10 μM)a	Variabel	0.1-0.5 μM
Templatb	Variabel	sesuai kebutuhan
Air Bebas Nuklir	Tambahkan hingga 20 μL

 

A. Biasanya, efek amplifikasi yang baik dapat diperoleh dengan konsentrasi akhir {{0}}.2 μM. Ketika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat disesuaikan dalam kisaran 0.12-1.0.5 μM.

B. Jumlah penambahan templat bervariasi sesuai jumlah salinan gen target dalam larutan templat. Gradien encerkan templat dan selidiki jumlah penambahan templat yang sesuai. Dalam sistem reaksi 20 μL, jumlah DNA cetakan harus kurang dari 100 ng. Bila menggunakan cDNA (larutan reaksi RT) dari reaksi RT-PCR sebagai templat, jumlah penambahan tidak boleh melebihi 10% dari total volume larutan reaksi PCR.

2. Prosedur reaksi PCR (dapat disesuaikan dengan model):

A. Metode dua langkah					B. Metode tiga langkah
Panggung	Melangkah	Siklus	Suhu	Waktu	Panggung	Melangkah	Siklus	Suhu	Waktu
Tahap 1	UDG inkubasi	1	50 derajat	2 menit	Tahap 1	UDG inkubasi	1	50 derajat	2 menit
Tahap 2	Pra- denaturasi	1	95 derajat	30 detik	Tahap 2	Pra- denaturasi	1	95 derajat	30 detik
Tahap 3	Denaturasi	40	95 derajat	15 detik	Tahap 3	Denaturasi	40	95 derajat	15 detik
	anil /Perpanjangan		60 derajat	30 detik		anil		55-65 derajat	10 detik
						Perpanjangan		72 derajat	30 detik

A. Untuk meningkatkan spesifisitas amplifikasi, prosedur dua langkah dapat digunakan atau suhu anil dapat ditingkatkan. Untuk meningkatkan efisiensi amplifikasi, prosedur tiga langkah dapat digunakan atau waktu perpanjangan dapat diperpanjang.

Catatan

1. Setelah dicairkan, aduk perlahan ke atas dan ke bawah, jangan divorteks, hindari gelembung, aduk rata sebelum digunakan.

2. Saat menyiapkan larutan reaksi, letakkan reagen di atas es.

3. Produk mengandung pewarna fluoresen, sehingga cahaya yang kuat harus dihindari saat menyiapkan larutan reaksi qPCR.

4. Tip sekali pakai yang baru harus digunakan untuk persiapan campuran reaksi untuk menghindari kontaminasi silang.

5. Hindari siklus pembekuan Master Mix, dan coba gunakan dalam waktu satu bulan setelah pencairan.

 

 

ABI: 7700, 7900, 7900HT, 7900 HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500/7500 Fast, ViiA 7™, seri QuantStudio™, PikoRealTM Cycler;

Strategi: Mx3000P®, 3005P™, 4000™;

Bio-Rad: CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ5™; Eppendorf: Realplex 2s, Mastercycler® ep, realplex;

IIIumina: Ramah Lingkungan QPCR;

Cepheid: SmartCycler®;

Qiagen Corbett: Seri Rotor-Gene®;

Roche: seri LightCycler™;

Takara: Seri Dadu Pengendara Sepeda Termal;

Analitikjena: seri qTOWER;

Hangzhou Bori: seri LineGene;

 

 

Prinsip desain primer Taqman

1. Tentukan probe sebelum merancang primer.

2. Saat merancang primer, sedekat mungkin dengan probe tanpa tumpang tindih dengan probe.

3. Hindari penggunaan 4 atau lebih G berturut-turut.

4. Nilai Tm setiap primer harus 58-60 derajat .

5. 5 nukleotida terakhir pada ujung primer tidak boleh lebih dari 2 G dan C.

6. Primer sebaiknya tidak mengandung rangkaian yang saling melengkapi, jika tidak maka akan membentuk jepit rambut.

7. Untuk menghindari amplifikasi genom, yang terbaik adalah merancang primer di seluruh ekson.

8. Panjang produk amplifikasi harus 50-150 bp untuk mendapatkan efisiensi PCR terbaik.

9. Tidak ditemukan produk lain yang tidak spesifik pada hasil perbandingan di NCBI.

 

 

1. Panjang probe harus 13-25 bp (13-30 bp jika probe TaqMan konvensional digunakan).

2. Nilai Tm harus 65 derajat ~70 derajat, yang biasanya 5 derajat ~10 derajat lebih tinggi dari nilai TM primer untuk memastikan bahwa probe secara istimewa berikatan dengan gen target selama anil.

3. Untuk primer, kandungan guanin-sitosin (G+C) harus antara 40% dan 70%.

4. Ujung 5' probe harus menghindari penggunaan G, karena ujung 5' G akan memiliki efek pendinginan, meskipun dipotong.

5. Di seluruh probe, kandungan C jelas lebih tinggi daripada G, dan kandungan G yang tinggi akan memiliki efek pendinginan, sehingga kita dapat memilih rantai berpasangan lain sebagai probe.

Prinsip desain probe Taqman MGB

1. Pewarna laporan (misalnya, FAMTM) dipasang pada ujung 5' probe.

2. Terdapat kelompok pendinginan non-fluoresensi (NFQ) di ujung 3' probe.

3. Bagian MGB melekat pada NFQ, dan MGB meningkatkan suhu anil (Tm) tanpa menambah panjang probe, sehingga probe yang lebih pendek dapat dirancang, tetapi tidak kurang dari 13 bp.

4. Prinsipnya, selama terdapat mutasi basa pada probe MGB, MGB dapat mendeteksinya (probe MGB tidak akan berikatan dengan gen target dan tidak akan menghasilkan sinyal fluoresen).

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: 2×universal blue multiplex probe qpcr master mix（dengan udg）, Cina 2×universal blue multiplex probe qpcr master mix（dengan udg） produsen, pemasok, pabrik