® IF555-Aglutinin Kuman Gandum (WGA,Lampu Merah)

 

Nama Produk	Kucing. TIDAK.	Spesifikasi.
iF555-Aglutinin Bibit Gandum(WGA,Lampu Merah)	G1731	100UL

 

 

Aglutinin bibit gandum (WGA) adalah lektin yang berikatan dengan N-asetil-D-glukosamin dan asam sialat, dan merupakan salah satu kelas lektin yang paling banyak dipelajari dan digunakan secara luas. Saat ini merupakan kelas lektin yang paling banyak dipelajari dan digunakan secara luas. WGA berikatan dengan glikokonjugat, dan turunan serta konjugatnya banyak digunakan untuk memberi label pada membran sel dan jaringan parut fibrotik untuk pencitraan dan analisis fluoresensi. Spesifisitas pengikatan karbohidrat dari WGA diarahkan pada rangkaian residu terkait -1,4-GlcNAc, yang dikenal sebagai dekstrin kitin. Setiap monosakarida mengandung dua situs pengikatan identik dan tidak berinteraksi yang saling melengkapi dengan tiga atau empat unit -1,4-GlcNAc. Dari monosakarida yang diuji, hanya GlcNAc yang berikatan dengan WGA, ManNAc tidak, dan GalNAc hanya berikatan lemah. WGA berikatan dengan afinitas tinggi terhadap residu GlcNAc internal dalam oligosakarida besar yang mengandung Gal (1-4)GlcNAc (1-3) (yaitu, glikan tipe poli(aminolaktosa)) berulang. Asam N-asetilneuraminat berpartisipasi dalam afinitas rendah interaksi WGA saja. WGA menunjukkan pola spesifisitas glikan yang kompleks yang dapat digunakan untuk analisis struktur karbohidrat kompleks. Imbuhan WGA iFluor®555 mungkin merupakan imbuhan WGA yang paling terang. Ini menunjukkan fluoresensi cerah dan merah dari pewarna iFluor®555. imbuhan iFluor®555 WGA berikatan dengan asam sialat dan residu N-asetilglukosaminil seperti halnya coupler AF555 WGA.

 

Wheat Germ Agglutinin (WGA) adalah lektin 36 kDa yang biasa digunakan untuk memberi label pada sel mamalia, membran sel bakteri dan ragi Gram positif, serta membran sakral rangka dan jantung, antara lain karena sifatnya yang dapat digabungkan dengan N-asetil. - -Residu D-glukosaminil dan N-asetil- -oligomer D-glukosaminil dalam membran sel. Apabila WGA digunakan untuk pewarnaan kardiomiosit, maka membran sel kardiomiosit dapat diwarnai sehingga dapat terlihat hipertrofik atau tidak dari perbandingan gambar dengan kelompok normal, serta diameter dan luas sel yang diwarnai. diukur dengan perangkat lunak khusus, memungkinkan analisis apakah kardiomiosit hipertrofi atau tidak.

 

 

Kirim dengan es basah; Simpan pada suhu -20 selama 12 bulan.

 

 

Komponen	G1722-50UL
iF555-Aglutinin Bibit Gandum(WGA,Lampu Merah)	100 μL
petunjuk	1 buah

 

 

1. Persiapkan sendiri1×PBS penyangga(pH 7.2-7.4, direkomendasikanG4202), fiksatif yang mengandung 3.0-4.0% formaldehida (disarankanG1101, mengandung 4% PFA),sealer pendinginan anti-fluoresensi(direkomendasikan G1401), Danlarutan pewarnaan DAPI siap pakai(direkomendasikanG1012).

2. Saat menggunakan produk untuk pertama kali, sentrifugasi produk yang telah meleleh sepenuhnya dengan kecepatan rendah selama 1 menit untuk mencegah hilangnya dinding tabung cairan. Disarankan untuk mengeluarkan produk sesuai dengan jumlah yang digunakan dalam satu percobaan untuk mencegah hilangnya pelarut karena penguapan. Simpan pada suhu -20 derajat dari cahaya.

3. Sebelum percobaan formal, aspirasi 5 μL iF555-Wheat Germ Agglutinin (WGA,Red Light) dan campur dengan 1 mL PBS untuk mendapatkanjika555-Solusi kerja WGA. Efek pewarnaan mungkin berbeda untuk jenis sel yang berbeda, silakan lihat literatur untuk mengetahui konsentrasi kerja pewarnaan yang optimal atau lakukan pra-uji untuk mengetahuinya.jika555-Solusi kerja WGAsiap pakai, disimpan pada suhu ruangan dan terlindung dari cahaya, serta digunakan pada hari yang sama.

 

 

Pewarnaan sel hidup (12-well plate sebagai contoh)

1. Cuci sel dengan buffer 1×PBS sebanyak 2 kali.

2. Tambahkan 100 μL larutan kerja iF555-WGA ke setiap sumur sel dan inkubasi selama 10-30 menit pada suhu 37 derajat, terlindung dari cahaya. Jaga penyegelan untuk mencegah penguapan cairan. Hapus larutan inkubasi dan cuci dengan larutan buffer 2-3 kali selama 3-5 menit setiap kali.

3. Setelah inkubasi selesai, sel dicuci tiga kali dengan buffer buffer 1× PBS selama 5 menit setiap kali.

4. Hasil diamati dengan mikroskop fluoresensi atau mikroskop confocal laser.

 

Memperbaiki pewarnaan sel (6-crawler sel pelat sumur sebagai contoh)

1. Sel-sel yang dikultur dirayapi (pada kepadatan pertemuan minimal 50%), media kultur dihilangkan, dan sel-sel dicuci dua kali dengan buffer 1x PBS yang dipanaskan sebelumnya pada suhu 37 derajat.

2. Tambahkan fiksatif dalam jumlah yang sesuai untuk menutupi sel dan fiksasi selama 10-30 menit pada suhu kamar.

3. Fiksatif diaspirasi dan sel dicuci dengan buffer 1× PBS pada suhu kamar 2-3 kali masing-masing selama 10 menit.

4. Setelah perayap sel dikocok sedikit hingga kering, gambarlah sebuah lingkaran dengan pena histokimia sehingga letak sel berada di tengah lingkaran. Ambil 100 μL larutan kerja iF555-WGA untuk menutupi sel sepenuhnya dan inkubasi pada suhu 37 derajat selama 30 menit jauh dari cahaya. Hati-hati dalam menutup dan mencegah cairan menguap untuk mengeringkan slide.

5. Setelah inkubasi selesai, sel dicuci tiga kali dengan buffer 1× PBS selama 5 menit setiap kali.

6. (Opsional) Tetesan larutan pewarnaan DAPI siap pakai ditambahkan ke slide crawler untuk menutupi sel, dan pewarnaan nuklir dilakukan selama 8 menit. Sel dicuci dengan buffer 1× PBS 2-3 kali untuk 30 detik-1 menit setiap kali.

7. Perayapan sel sedikit dikocok hingga kering dan dibalikkan ke slide dengan setetes sealer pendingin anti-fluoresensi, dan sealer berlebih dihilangkan dengan handuk kertas.

[Catatan]Langkah 6 dan 7, dapat diganti dengan sealer pendinginan antifluoresensi yang mengandung DAPI (Rekomendasi G1407), yang menyelesaikan pewarnaan inti dan penyegelan film pada saat yang bersamaan.

8. Hasilnya diamati dengan mikroskop fluoresensi atau mikroskop confocal laser dengan saluran 555 (Ex/Em=556/574 nm) dan DAPI (Ex/Em=364/454 nm) yang dipilih.

 

Pewarnaan bagian jaringan

1. Pra-perawatan pemotongan jaringan:

Bagian beku (bagian beku jaringan segar atau bagian beku jaringan tetap) didiamkan pada suhu kamar selama beberapa menit dan dikembalikan ke suhu kamar; bagian direndam dalam fiksatif selama 10-15 menit pada suhu kamar, dikeluarkan dan dikeringkan secara alami, lalu dibasahi dan dicuci dalam air murni atau buffer 1×PBS untuk menghilangkan sisa fiksatif pada jaringan.

Bagian parafin dikeringkan dan direhidrasi;

Bagian jaringan (bagian parafin atau bagian beku dari jaringan tetap) ditempatkan dalam kaset perbaikan yang diisi dengan buffer perbaikan antigen EDTA (pH 8.0) dalam oven microwave untuk perbaikan antigen. Panas sedang selama 8 menit hentikan api selama 8 menit hingga api sedang-rendah selama 7 menit, proses ini harus mencegah penguapan buffer yang berlebihan, jangan mengeringkan slide. Setelah pendinginan alami, slide ditempatkan dalam buffer 1×PBS dan dicuci dengan cara dikocok pada pengocok penghilang warna sebanyak 3 kali, setiap kali selama 5 menit.

2. Pewarnaan: Gambarlah lingkaran di sekeliling jaringan dengan pena histokimia setelah bagian jaringan agak kering. Tambahkan 50-100 μL larutan kerja iF555-WGA ke dalam lingkaran untuk menutupi jaringan, dan inkubasi pada suhu 37 derajat dari cahaya selama 30 menit. Jaga penyegelan untuk mencegah cairan menguap dan mengeringkan slide.

3. Pencucian: Setelah inkubasi selesai, sampel dicuci tiga kali dengan buffer 1× PBS selama 5 menit setiap kali.

4. Pewarnaan nukleus (opsional): tambahkan setetes demi setetes larutan pewarnaan DAPI siap pakai ke dalam sampel untuk menutupi sel, dan lakukan pewarnaan nukleus selama 8 menit. Cuci sampel dengan buffer 1×PBS 2-3 kali selama 30 s-1 menit setiap kali.

5. Penyegelan: Setelah bagian dikocok sedikit hingga kering, tambahkan setetes Anti-fluoresensi quenching sealer ke sampel dan tutup dengan kaca penutup yang sesuai.

[Catatan]Langkah 4 dan 5, dapat diganti dengan sealer pendinginan antifluoresensi yang mengandung DAPI (Rekomendasi G1407), yang menyelesaikan pewarnaan inti dan penyegelan film pada saat yang bersamaan.

6. Mikroskopi: Mikroskop fluoresensi atau mikroskop confocal laser untuk mengamati hasil, memilih saluran 488 (Ex/Em=556/574 nm) dan DAPI (Ex/Em=364/454 nm).

 

 

1. Sampel yang telah difiksasi dalam jangka waktu lama (misalnya bagian parafin) harus menjalani proses perbaikan pirolisis, jika tidak, hasil positifnya akan lemah atau hampir tidak ada.

2. Pewarnaan WGA untuk analisis miokard memerlukan jaringan miokard tingkat tinggi, yang harus lengkap dan homogen, dan yang terbaik adalah menyediakan spesimen bagian parafin.

3. Untuk sampel seluler, hindari penggunaan larutan permeabilisasi sebelum pewarnaan, karena dapat menyebabkan pewarnaan komponen struktur sitoplasma.

4. Pewarna fluoresen harus mengalami pendinginan, dan disarankan agar foto pengujian dan observasi diselesaikan sesegera mungkin setelah pewarnaan.

5. Harap kenakan jas lab dan sarung tangan selama pengoperasian.

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: ® if555-aglutinin bibit gandum (wga,lampu merah), Cina ® if555-aglutinin bibit gandum (wga,lampu merah), produsen, pemasok, pabrik