Kit Pewarnaan Fluoresensi Merah Membran Sel Dil

 

Nama Produk	Kucing. TIDAK	Spesifikasi.
Kit Pewarnaan Fluoresensi Merah Membran Sel Dil	G1705	100-1000 T

 

 

Dil, juga dikenal sebagai DilC18(3), 1,1`-Dioctadecyl-3,3,3`,3`-tetramethylindocarbocyanine perchlorate, dengan berat molekul 933,87, adalah kelas dialkildicarbocyanine lipofilik, rantai panjang pewarna, pewarna fluoresen, biasa digunakan dalam pelabelan membran sel dan struktur biologis lain yang larut dalam lemak. Setelah memasuki membran sel, Dil dapat berdifusi kesamping dan secara bertahap menodai seluruh membran sel. Fluoresensi Dil sangat lemah sebelum memasuki membran sel, dan intensitas fluoresensi akan sangat meningkat ketika berikatan dengan sel, dan dapat memancarkan warna oranye- fluoresensi merah setelah eksitasi dan dapat dideteksi oleh filter TRITC standar. Panjang gelombang eksitasi maksimum Dil adalah 550 nm, dan panjang gelombang emisi maksimum adalah 564 nm. Sesuai dengan karakteristik Dil, dapat menodai sel hidup maupun sel tetap. Selain itu. Probe Dil umumnya tidak mempengaruhi kelangsungan hidup sel, sehingga sel berlabel maju atau mundur atau beberapa zat (eksosom) dapat digunakan sebagai deteksi pelacak.

Kit Pewarnaan Fluoresensi Merah Membran Sel Dil berisi probe fluoresensi Dil dan buffer pewarnaan yang dioptimalkan, yang dapat membuat pewarnaan membran sel lebih cepat, fluoresensi lebih cerah dan stabil.

 

 

Kirim dengan es kering; simpan pada suhu -20 dalam gelap, berlaku selama 6 bulan.

 

 

Nomor Komponen	Komponen	G1704
G1705-1	Probe Fluoresen Merah Membran Sel Dil	100μL
G1705-2	Penyangga Pewarnaan	100mL
petunjuk		Satu salinan

 

 

1. Persiapan larutan kerja pewarnaan Dil:

1.1. Campur dan encerkan Dil Cell Membrane Red Fluorescent Probe dengan Staining Buffer dengan perbandingan 1:250 untuk menyiapkan Dil Staining Working Solution (siap pakai); perhatikan bahwa rasio pengenceran probe Dil dapat disesuaikan pada 1:250-1:500 sesuai dengan situasi spesifik untuk mendapatkan efek pewarnaan terbaik.

 

2. Pewarnaan sel suspensi hidup

2.1. Sentrifugasi sel yang tersuspensi pada 500-1,000×g pada suhu kamar selama 3-5 menit, buang supernatan sel;

2.2. Tambahkan larutan pewarna Dil dalam jumlah yang sesuai untuk mensuspensikan kembali sel hingga kepadatan sel akhir pada 1-2×106 sel/mL.

2.3. Inkubasi pada suhu 37 derajat dalam gelap selama 5-20 menit. Waktu inkubasi optimal bervariasi untuk sel yang berbeda. Mulailah dengan 5 menit dan optimalkan waktu inkubasi berdasarkan hasil pewarnaan akhir.

2.4. Di akhir inkubasi, sentrifugasi pada 500-1000 g selama 3-5 menit pada suhu kamar dan aspirasi larutan pewarna Dil;

2.5. Sel diresuspensi dengan PBS atau media kultur sel yang telah dipanaskan sebelumnya pada suhu 37 derajat dan disentrifugasi pada 500-1000 g selama 3-5 menit untuk menghilangkan supernatan;

2.6. Ulangi langkah 2.5.

2.7. Dideteksi dengan flow cytometry secara langsung atau dengan mikroskop fluoresensi setelah memindahkan sel ke multi-well plate, cawan kultur sel, atau slide pendakian sel. Dil memiliki eksitasi maksimum pada 550 nm dan emisi maksimum pada 564 nm.

 

3. Pewarnaan sel hidup yang melekat (6-well plate sebagai contoh):

3.1. Sel-sel yang melekat pada benih di 6-well plate dengan kepadatan tertentu.

3.2. Keluarkan media kultur dan cuci sel dua kali dengan PBS (Rekomendasikan G4202). Tambahkan 1 mL larutan pewarna Dil (pelat berukuran lain, disesuaikan seperlunya untuk memastikan bahwa pewarna menutupi sel);

3.3. Inkubasi pada suhu 37 derajat dalam kegelapan selama 5-20menit. Waktu inkubasi optimal bervariasi untuk sel yang berbeda. Mulailah dengan 5 menit dan optimalkan waktu inkubasi berdasarkan hasil pewarnaan akhir.

3.4. Aspirasi larutan yang berfungsi untuk mewarnai membran sel dan cuci sel 1-2 kali dengan PBS atau media sel yang telah dipanaskan sebelumnya.

3.5. Tambahkan media kultur sel yang telah dipanaskan sebelumnya atau media sel pada suhu 37 derajat dan deteksi sel dengan mikroskop fluoresensi. Dil memiliki eksitasi maksimum pada 550 nm dan emisi maksimum pada 564 nm.

 

4. Pewarnaan sel yang melekat tetap:

4.1. Contoh pra-pemrosesan:

Untuk sel: Keluarkan media sel dan cuci 1-2 kali dengan PBS. Tambahkan larutan pengikat paraformaldehida 4% (Rekomendasikan G1101) selama 10 menit pada suhu kamar. Hapus larutan perbaikan dan cuci 2-3 kali dengan PBS;

4.2. Permeabilisasi: Tambahkan 0.1-0.5% Triton-100 (disiapkan dengan PBS) dan diresapi selama 10 menit pada suhu kamar. Hilangkan larutan permeabilisasi dan cuci 2-3 kali dengan PBS.

4.3. (Opsional, pelabelan imunofluoresen) Inkubasi dengan antibodi sesuai dengan protokol immunostaining atau inkubasi dengan pewarna lain.

Catatan: Larutan pemblokiran, pengencer antibodi, dan larutan pencuci untuk pewarnaan imun tidak boleh mengandung deterjen.

4.4. Tambahkan larutan pewarna Dil dalam jumlah yang sesuai untuk menutupi sel, inkubasi pada suhu 37 derajat dari cahaya selama 5-20 menit, dan aspirasi larutan pewarna Dil. Disarankan waktu pewarnaan disesuaikan dengan sampel sel tertentu untuk mendapatkan hasil pewarnaan yang optimal;

4.5. Sel dicuci 2-3 kali dengan PBS dan kemudian ditempatkan di bawah mikroskop fluoresensi untuk observasi (sel perlu ditutup dengan PBS dalam jumlah yang sesuai). Dil memiliki panjang gelombang eksitasi maksimum 550 nm dan panjang gelombang emisi maksimum 564 nm .

 

5. Pelabelan neon pada eksosom:

5.1. Presipitasi eksosom yang disuspensikan kembali dengan larutan kerja pewarnaan Dil dalam jumlah yang sesuai.

5.2. Inkubasi pada suhu 37 derajat selama 30 menit dalam gelap.

5.3. (opsional) Encerkan sampel dengan PBS volume 10-kali lipat.

5.4. Eksosom diekstraksi kembali sesuai protokol ekstraksi sebelumnya untuk menghilangkan kelebihan pewarna.

5.5. Kumpulkan presipitasi eksosom dan resuspensi dalam PBS untuk mendapatkan eksosom berlabel Dil. Ini dapat digunakan untuk eksperimen selanjutnya, seperti serapan seluler.

 

 

1. Semua pewarna fluoresen memiliki masalah pendinginan, harap lindungi dari cahaya selama pengoperasian untuk memperlambat pendinginan fluoresensi.

2. Karena probe bersifat lipofilik, harap hindari penggunaan reagen yang mengandung gliserin atau bahan organik lainnya.

3. Jika fiksasi diperlukan, kami sarankan untuk melakukan fiksasi dalam paraformaldehyde 4%. Solusi perbaikan lain yang tidak tepat akan menyebabkan latar belakang fluoresensi tinggi.

4. Rasio pengenceran optimal dan waktu inkubasi probe harus disesuaikan dengan situasi aktual karena perbedaan sensitivitas antara sel dan persyaratan eksperimen.

5. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, mohon kenakan kacamata pengaman, sarung tangan, atau pakaian pelindung.

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: kit pewarnaan fluoresensi merah membran sel dil, Cina produsen kit pewarnaan fluoresensi merah membran sel dil, pemasok, pabrik