Buffer Lisis RIPA (Kuat)

RIPA Lysis Buffer adalah solusi lisis cepat tradisional untuk sel dan jaringan. Ini tersedia dalam berbagai formulasi dan diklasifikasikan menjadi kuat, sedang atau lemah. Sampel protein yang diperoleh dari lisis jaringan dan sel dalam larutan lisis kuat RIPA dapat digunakan untuk eksperimen rutin PAGE, Western, dan eksperimen lainnya yang tidak memerlukan aktivitas protein secara ketat. Produk ini mengandung 50 mM Tris-HCl (pH 7,4), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA-2Na, 1% Triton X-100, 1% natrium deoksikolat, dan 0,1% SDS . Cocok untuk jaringan dan sel hewan atau tumbuhan, namun juga dapat digunakan untuk sampel jamur atau bakteri.

Kirim dengan es basah; Simpan di tempat gelap pada suhu 2-8 derajat ; berlaku selama 18 bulan.

Persiapan Eksperimen

Memerlukan protease inhibitor yang disediakan sendiri. Inhibitor protease (G2006, G2007, G2008, dll.) harus ditambahkan ke RIPA Lysis (Strong) sebelum digunakan untuk mencegah degradasi protein. Semua referensi RIPA Lysate (Strong) pada petunjuk berikut telah ditambahkan dengan protease inhibitor.

l Untuk sampel jaringan

1. Potongan tisu dicuci dengan PBS yang sudah didinginkan sebelumnya (disarankan G4202) untuk menghilangkan noda darah, dipotong kecil-kecil dan dimasukkan ke dalam homogenizer.

2. Tambahkan 10 kali volume jaringan buffer lisis RIPA (kuat) dan homogenkan pada suhu rendah (Disarankan untuk menggunakan instrumen penggilingan jaringan berkecepatan tinggi KZ-III-F dan KZ-III-FP, yang dikembangkan dan diproduksi secara independen oleh Servicebio). Perhatikan bahwa jumlah lisat RIPA (kuat) dapat ditambahkan dengan perbandingan sekitar 50 mg jaringan dengan 1 mL lisat. Jika kandungan protein jaringan rendah, jumlah lisat dapat dikurangi untuk meningkatkan konsentrasi protein dalam larutan ekstrak kasar.

3. Pindahkan homogenat ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL dan lakukan osilasi. Mandi es selama 30 menit dengan pemipaan berulang setiap 10 menit untuk memastikan lisis sel jaringan secara menyeluruh.

4. Centrifuge pada 12000 xg selama 5 menit dan kumpulkan supernatan sebagai larutan protein total.

l Untuk sampel sel yang patuh

1. Cuci sel dengan PBS sebanyak 2-3 kali dan aspirasi sisa cairan secara menyeluruh pada kali terakhir.

2. Aspirasi RIPA Lysis Buffer (Kuat) ke dalam pelat kultur sel dan labu dengan perbandingan 250 μL sel lisat per sumur 6-pelat sumur, kocok pelat kultur dan labu berulang kali agar lisat bersentuhan penuh dengan sel selama 3-5 mnt.

3. Kikis sel dengan pengikis sel dan kumpulkan ke dalam tabung centrifuge.

4. Lisis di atas es selama 30 menit.

5. Centrifuge pada 12000 xg selama 5 menit dan kumpulkan supernatan sebagai larutan protein total.

l Untuk sampel sel suspensi

1. Centrifuge.untuk mengumpulkan sel.

2. Campur sitosol dengan RIPA Lysis Buffer (Strong) dengan perbandingan 250 μL lisat per sumur sel pada 6-well plate dan kocok.

3. Penangas es selama 30 menit, pemipaan berulang kali setiap 10 menit untuk memastikan lisis sel sempurna.

4. Centrifuge pada 12000 xg selama 5 menit dan kumpulkan supernatan sebagai larutan protein total.

l Untuk sampel bakteri atau jamur

1. Keluarkan 1 mL suspensi, sentrifugasi untuk menghilangkan supernatan dan cuci sekali dengan PBS untuk menghilangkan cairan sepenuhnya. Vortex untuk membubarkan bakteri sebanyak mungkin.

2. Tambahkan 100-200 μL RIPA Lysis Buffer (Strong) dan vorteks perlahan agar tercampur rata dengan lisat.

3. Penangas es selama 30 menit, dipipet berulang kali setiap 2 menit untuk memastikan lisis sel sempurna.

4. Centrifuge pada 12000 xg selama 5 menit dan kumpulkan supernatan sebagai larutan protein total.

1. Jaringan atau sel mungkin tampak kental saat mengalami lisis. Hal ini dapat dilakukan dengan meniup berulang kali menggunakan pipettor atau mengocok dengan vorteks hingga menjadi cair. Tambahkan larutan lisis dalam jumlah yang sesuai jika masih kental.

2. Reagen ini tidak mengandung protease inhibitor. Tambahkan inhibitor protease Anda sendiri sebelum digunakan. G2006, G2007, G2008 dan protease inhibitor terkait lainnya dari perusahaan kami direkomendasikan.

3. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, harap kenakan kacamata pengaman, sarung tangan, atau pakaian pelindung.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: penyangga lisis ripa (kuat), produsen, pemasok, pabrik penyangga lisis ripa (kuat).