Kit Pemurnian DNA dan Ekstraksi Gel Universal

Kit Pemurnian DNA dan Ekstraksi Gel Universal menggunakan Kolom Mini Bind DNA yang unik, yang dapat digunakan untuk memulihkan fragmen DNA dari gel agarosa TAE atau TBE serta untuk pemurnian langsung produk PCR guna memenuhi berbagai kebutuhan eksperimental. Buffer GL mengandung indikator pH, yang dapat menilai apakah larutan gel atau pemulihan produk PCR telah mencapai keadaan optimal sesuai dengan warna larutan. Fragmen DNA berukuran 100 bp-10 kb dapat dipulihkan dengan tingkat pemulihan 85%. Kapasitas pengikatan DNA setiap kolom mencapai 20 ug. DNA yang dipulihkan menggunakan kit ini cocok untuk berbagai operasi rutin, termasuk pencernaan enzim, PCR, pengurutan, penyaringan perpustakaan, eksperimen ligasi dan transformasi.

Kirim dan simpan pada suhu kamar, berlaku selama 12 bulan.

Ekstraksi DNA dari gel agarosa

1. Kesetimbangan Kolom : Tempatkan Bind DNA Mini Columns ke dalam tabung pengumpul, kemudian tambahkan 500 μL larutan Buffer BL ke dalam Bind DNA Mini Columns, sentrifugasi dengan kecepatan 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan ke dalam tabung pengumpul, dan masukkan kembali Kolom Mini Bind DNA ke dalam tabung pengumpul (harap gunakan kolom yang diproses pada hari yang sama).

2. Pita DNA tujuan tunggal dipotong dari gel agarosa dengan pisau bersih (buang kelebihannya sebanyak mungkin) ke dalam tabung centrifuge yang bersih, timbang.

3. Tambahkan Buffer GL dengan volume yang sama ke dalam blok gel (jika berat gel 0,1 g dan volumenya dianggap 100 µL, tambahkan 100 µL Buffer GL) dan penangas air pada suhu 60 derajat sampai blok gel benar-benar larut (selama waktu ini, terus putar tabung centrifuge secara perlahan ke atas dan ke bawah untuk memastikan bahwa blok gel cukup larut, dan jika volume gel blok terlalu besar, potong blok gel menjadi potongan-potongan kecil terlebih dahulu) (Catatan: Untuk hasil pemulihan yang tinggi, 1/2 volume gel isopropanol dapat ditambahkan setelah menambahkan Buffer GL untuk melarutkan gel sepenuhnya untuk meningkatkan laju pemulihan; yang terbaik adalah untuk menurunkan suhu larutan ke suhu kamar setelah gel larut sepenuhnya sebelum memuat kolom karena kolom memiliki kemampuan yang lebih kuat untuk mengikat DNA pada suhu kamar. Gel akan tampak berwarna kuning muda setelah peleburan sempurna dan dapat digunakan untuk operasi selanjutnya warna larutan menjadi ungu atau merah setelahnya gel telah meleleh seluruhnya, gunakan 10 µL natrium asetat 3M (pH 5,0) untuk mengubah warna larutan menjadi kuning pucat sebelum melanjutkan).

4. Pindahkan seluruh larutan yang diperoleh pada langkah sebelumnya ke dalam kolom (kolom adsorpsi dalam tabung pengumpul), sentrifugasi pada 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan ke dalam tabung pengumpul, dan masukkan kolom ke dalam tabung pengumpul (Catatan: volume kolom adalah 800 μL, jika volume sampel lebih besar dari 800 μL, dapat ditambahkan secara bertahap).

5. Tambahkan 700 μL Buffer PW ke dalam kolom (periksa apakah etanol anhidrat telah ditambahkan sebelum digunakan), sentrifugasi pada 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan dari tabung pengumpul, dan letakkan kolom ke dalam tabung pengumpul (Catatan: Jika DNA yang dipulihkan akan digunakan dalam eksperimen yang sensitif terhadap garam, seperti eksperimen ligasi ujung datar atau pengurutan langsung, disarankan agar Buffer PW didiamkan selama 2-5 menit sebelum sentrifugasi)

6. Ulangi langkah 5.

7. Tempatkan kolom dalam tabung pengumpul dan sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit untuk menghilangkan sisa cairan sebanyak mungkin. Biarkan kolom pada suhu kamar selama 5 menit dan keringkan secara menyeluruh (Catatan: residu etanol dalam larutan pembilas akan mempengaruhi pencernaan enzim selanjutnya, PCR dan percobaan lainnya)

8. Masukkan kolom ke dalam tabung centrifuge yang bersih, biarkan pada suhu kamar selama 5 menit, keringkan secara menyeluruh (Catatan: residu etanol dalam larutan pembilas akan mempengaruhi pencernaan enzim selanjutnya, PCR dan percobaan lainnya), tambahkan 3{ {21}}~50 μL Elution Buffer atau ddH2O di tengah membran yang menjorok ke membran (lebih baik memanaskan terlebih dahulu Elution Buffer atau ddH2O pada suhu 60-65 derajat ), dan biarkan pada suhu kamar selama 2 menit, lalu sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit. Biarkan membran pada suhu kamar selama 2 menit, lalu sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit untuk mengumpulkan larutan DNA. (Catatan: Volume eluen tidak boleh kurang dari 30 μL, volume yang terlalu kecil akan mempengaruhi efisiensi perolehan. Nilai pH eluen mempunyai pengaruh yang besar terhadap efisiensi elusi. Jika pengurutan akan dilakukan nanti, ddH2O harus digunakan sebagai eluen dan pH-nya harus berada dalam kisaran 7.0-8.5. pH yang lebih rendah dari 7,0 akan mengurangi efisiensi elusi; dan produk DNA harus disimpan pada -20 derajat untuk mencegah degradasi DNA. (Untuk meningkatkan pemulihan DNA, larutan yang diperoleh dengan sentrifugasi dapat diisi kembali ke dalam kolom sentrifugal, ditempatkan pada suhu kamar selama 2 menit, disentrifugasi pada suhu 10,{{25 }} g selama 2 menit, dan larutan DNA dikumpulkan ke dalam tabung centrifuge).

(10) Pemulihan fragmen DNA dari larutan reaksi PCR atau larutan reaksi pencernaan

1. Kesetimbangan Kolom : Tempatkan Bind DNA Mini Columns ke dalam tabung pengumpul, kemudian tambahkan 500 μL larutan Buffer BL ke dalam Bind DNA Mini Columns, sentrifugasi dengan kecepatan 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan ke dalam tabung pengumpul, dan masukkan kembali Kolom Mini Bind DNA ke dalam tabung pengumpul (harap gunakan kolom yang diproses pada hari yang sama).

2. Perkirakan volume larutan reaksi PCR atau larutan reaksi destruksi, tambahkan 3 kali volume larutan Buffer GL ke dalamnya (tambahkan tidak kurang dari 150 μL Buffer GL), dan aduk rata (tidak perlu dihilangkan minyak parafin atau minyak mineral). (Catatan: Untuk hasil perolehan kembali yang tinggi, isopropanol dapat ditambahkan 3/4 volume larutan PCR atau destruksi setelah penambahan Buffer GL untuk meningkatkan laju perolehan; larutan harus berwarna kuning muda setelah pencampuran sebelum melanjutkan. Jika warnanya larutan berwarna ungu atau merah setelah pencampuran, harap gunakan 10 µL natrium asetat 3M (pH 5,0) untuk mengubah warna larutan menjadi kuning muda sebelum melanjutkan).

3. Pindahkan seluruh larutan yang diperoleh pada langkah sebelumnya ke dalam Bind DNA Mini Column (Ikat DNA Mini Columns dalam tabung pengumpul), sentrifugasi pada 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan ke dalam tabung pengumpul , dan masukkan Bind DNA Mini Column ke dalam tabung pengumpul (Catatan: volume Bind DNA Mini Column adalah 800 μL, jika volume sampel lebih besar dari 800 μL, dapat ditambahkan secara bertahap).

4. Tambahkan 700 μL larutan Buffer PW ke dalam Bind DNA Mini Column (periksa apakah telah ditambahkan etanol anhidrat sebelum digunakan), sentrifugasi pada 10,000 g selama 1 menit, buang sisa cairan ke dalam tabung pengumpul, dan tempatkan Kolom Mini Bind DNA ke dalam tabung pengumpul (Catatan: Jika DNA yang dipulihkan akan digunakan untuk eksperimen yang sensitif terhadap garam, seperti ligasi ujung datar atau pengurutan langsung, disarankan agar Buffer PW diizinkan didiamkan selama 2-5 menit setelah penambahan sebelum sentrifugasi).

5. Ulangi langkah 4.

6. Tempatkan kolom dalam tabung pengumpul dan sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit untuk menghilangkan sisa cairan sebanyak mungkin.

7. Masukkan kolom ke dalam tabung centrifuge yang bersih, biarkan pada suhu kamar selama 5 menit, keringkan secara menyeluruh (Catatan: residu etanol dalam larutan pembilas akan mempengaruhi pencernaan enzim selanjutnya, PCR dan percobaan lainnya), tambahkan 3{ {21}}~50 μL Elution Buffer atau ddH2O di tengah membran yang menjorok ke membran (lebih baik memanaskan terlebih dahulu Elution Buffer atau ddH2O pada suhu 60-65 derajat ), dan biarkan pada suhu kamar selama 2 menit, lalu sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit. Biarkan membran pada suhu kamar selama 2 menit, lalu sentrifugasi pada 10,000 g selama 2 menit untuk mengumpulkan larutan DNA. (Catatan: Volume eluen tidak boleh kurang dari 30 μL, volume yang terlalu kecil akan mempengaruhi efisiensi perolehan. Nilai pH eluen mempunyai pengaruh yang besar terhadap efisiensi elusi. Jika pengurutan akan dilakukan nanti, ddH2O harus digunakan sebagai eluen dan pH-nya harus berada dalam kisaran 7.0-8.5. pH yang lebih rendah dari 7,0 akan mengurangi efisiensi elusi; dan produk DNA harus disimpan pada -20 derajat untuk mencegah degradasi DNA. (Untuk meningkatkan jumlah DNA yang diperoleh kembali, larutan yang diperoleh dengan sentrifugasi dapat diisi kembali ke dalam kolom sentrifugal, dibiarkan pada suhu kamar selama 2 menit, disentrifugasi pada suhu 10,{{25} } g selama 2 menit, dan larutan DNA dikumpulkan dalam tabung centrifuge).

1. Penambahan Buffer BL meningkatkan kapasitas adsorpsi kolom adsorpsi dan meningkatkan homogenitas dan stabilitas kolom, menghilangkan pengaruh suhu/kelembaban tinggi atau faktor lingkungan lain yang tidak diinginkan pada kolom, dan langkah keseimbangan kolom juga dapat dilakukan. dihilangkan.

2. Harap periksa apakah jumlah etanol anhidrat yang ditentukan ditambahkan ke Buffer PW sebelum digunakan.

1. Harap kencangkan tutupnya segera setelah setiap larutan digunakan.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: kit pemurnian DNA universal dan ekstraksi gel, produsen, pemasok, pabrik pemurnian DNA universal dan ekstraksi gel Cina