Kit Miniprep Plasmid Bebas Endo

Kit ini menggunakan larutan buffer yang diformulasikan khusus, dikombinasikan dengan teknologi adsorpsi asam nukleat yang dapat dibalik oleh membran gel silika, hampir dapat sepenuhnya menghilangkan endotoksin, protein, dan kotoran lainnya dari 1~5 mL kultur Escherichia coli, dan hasil DNA plasmid adalah 5 ~20 Agustus. Plasmid yang diekstraksi dapat digunakan dalam eksperimen biologis seperti pencernaan enzim restriksi, reaksi ligasi, amplifikasi PCR, pengurutan, transformasi, transfeksi, dll.

RNase A dikirim dengan es basah dan disimpan pada suhu -20 derajat . Reagen lainnya dikirim dan disimpan pada suhu kamar; berlaku selama 12 bulan.

1. Etanol anhidrat dan tabung sentrifugasi 1,5 mL bebas Nuklease diperlukan tetapi tidak disertakan dalam kit ini.

2. Siapkan penangas air atau modul pemanas 42 derajat.

3. Tambahkan semua RNase A yang disediakan dalam kit ke Buffer P1 sebelum digunakan, dan dapat disimpan pada suhu 4 derajat selama 6 bulan.

4. Harap tambahkan 60 mL etanol anhidrat ke Buffer PW sebelum digunakan.

5. Jika Buffer P2 mengendap, harap panaskan dalam penangas air pada suhu 37 derajat selama beberapa menit untuk mengembalikan klarifikasi. Setelah menggunakan Buffer P2, tutupnya harus segera ditutup untuk menghindari kontak jangka panjang dengan udara.

6. Harap pra-dinginkan Buffer P3 pada suhu 4 derajat sebelum digunakan.

1. Saldo kolom: Tambahkan 500 μL Buffer BL ke HiBind DNA Mini Column (HiBind DNA Mini Column dimasukkan ke dalam Collection Tube terlebih dahulu), sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, buang filtratnya , dan masukkan kembali Kolom DNA HiBind ke dalam Tabung Pengumpul (kolom yang telah diberi perlakuan sebaiknya segera digunakan).

2. Panen kultur bakteri dari 1~5 mL cairan bakteri segar dengan cara sentrifugasi pada kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar (buang supernatan sebanyak mungkin).

3. Tambahkan 250 μL Buffer P1 (harap periksa terlebih dahulu apakah akan menambahkan RNase A atau tidak), gunakan pipet atau osilator pusaran untuk menghentikan bakteri secara menyeluruh (pastikan untuk membubarkan bakteri secara menyeluruh, jika tidak maka akan mempengaruhi lisis, sehingga mengakibatkan kualitas rendah dan kemurnian plasmid yang diekstraksi).

4. Tambahkan 250 μL Buffer P2, segera dan balikkan perlahan selama 8~10 kali agar bakteri benar-benar lisis (langkah ini tidak boleh dikocok dengan keras, dan harus dilakukan dalam waktu 5 menit). Pada titik ini larutan seharusnya sudah bening dan lengket, jika tidak bening mungkin bakterinya terlalu banyak dan lisisnya belum sempurna, sehingga harus dipertimbangkan untuk mengurangi jumlah bakteri.

5. Tambahkan 250 μL Buffer P3 (dinginkan terlebih dahulu), segera dan terbalik perlahan 10~12 kali, larutan tampak menggumpal kompak, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 10 menit pada suhu kamar, Pindahkan supernatan ke tabung centrifuge 1,5 mL yang baru.

6. Tambahkan 75 μL Buffer ER, letakkan 10 menit di atas es setelah diaduk terbalik (aduk terbalik 3~5 kali selama periode tersebut), larutan berwarna biru transparan.

7. Inkubasi pada suhu 42 derajat selama 5 menit, larutan memulihkan kekeruhannya. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 10 menit pada suhu kamar, larutan dibagi menjadi lapisan atas dan bawah, lapisan atas berupa fasa air jernih dan lapisan bawah berwarna biru. Kumpulkan fase air bagian atas dengan hati-hati ke dalam tabung centrifuge 1,5 mL Bebas Nuklease yang baru.

8. Tambahkan etanol anhidrat 0,5 kali volume larutan di atas, aduk terbalik dan pindahkan ke HiBind DNA Mini Column (tidak lebih dari 700 μL setiap kali). Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, buang filtratnya ke dalam Collection Tube. Masukkan kembali Kolom Mini DNA HiBind ke dalam Tabung Pengumpul (larutan dapat melewati kolom berkali-kali).

9. Tambahkan 600 μL Buffer ED ke dalam HiBind DNA Mini Column, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, buang filtratnya ke dalam Collection Tube. Masukkan kembali Kolom Mini DNA HiBind ke dalam Tabung Pengumpul.

10. Tambahkan 600 μL Buffer PW ke HiBind DNA Mini Column, sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 1 menit pada suhu kamar, buang filtratnya ke dalam Collection Tube. Masukkan kembali Kolom DNA Mini HiBind ke dalam Tabung Pengumpul.

11. Ulangi langkah 10.

12. Sentrifugasi dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit pada suhu kamar, tempatkan Kolom Mini DNA HiBind ke dalam Tabung Centrifuge 1,5 mL Bebas Nuklease yang baru. Buka tutupnya dan diamkan selama 5 menit pada suhu kamar untuk menguapkan etanol secara menyeluruh.

13. Tambahkan 50 μL Buffer TE atau Air Bebas Endo ke pusat membran Kolom Mini DNA HiBind dan letakkan pada suhu kamar selama 2 menit. Centrifuge dengan kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit. Jika Anda perlu meningkatkan efisiensi pemulihan plasmid, larutan yang diperoleh dapat ditambahkan kembali ke HiBind DNA Mini Column, letakkan pada suhu kamar selama 2 menit dan sentrifugasi pada kecepatan 12,000 rpm selama 2 menit.

14. DNA plasmid yang diperoleh dapat disimpan dalam waktu lama pada suhu -20 .

1. Harap baca Manual Produk dengan seksama sebelum digunakan.

2. Bila jumlah salinan plasmid yang diekstraksi rendah atau fragmen plasmid lebih besar dari 10kb, jumlah kumpulan bakteri harus ditingkatkan, dan dosis Buffer P1, Buffer P2 dan Buffer P3 harus ditingkatkan dalam proporsi yang sama.

3. Etanol harus diuapkan sepenuhnya sebelum mengelusi plasmid untuk menghindari pengaruh sisa etanol pada percobaan hilir.

4. Buffer TE dapat dipanaskan terlebih dahulu pada suhu 60~65 derajat dan waktu inkubasi elusi dapat diperpanjang untuk meningkatkan efisiensi elusi.

5. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, mohon kenakan jas lab dan sarung tangan sekali pakai.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: kit miniprep plasmid bebas endo, produsen, pemasok, pabrik kit miniprep plasmid bebas endo di Cina