Reagen Transfeksi PEI 40K

Reagen Transfeksi PEI 40K (reagen transfeksi polietilenimina linier) adalah polimer kationik bermuatan tinggi dengan berat molekul 40,000 berdasarkan polietilenimina linierisasi, yang bermuatan positif dan secara efektif dapat mengikat asam nukleat bermuatan negatif untuk membentuk kompleks dengan mereka dan memasukkannya ke dalam sel, dan cocok untuk transfeksi DNA plasmid dalam sel. Reagen transfeksi PEI 40K (linearized polietilenimina) memiliki sitotoksisitas yang rendah, efisiensi transfeksi yang tinggi dan biaya yang rendah, sehingga sangat hemat biaya dibandingkan dengan reagen transfeksi berbasis liposom. Telah divalidasi bahwa reagen transfeksi PEI 40K linier banyak digunakan dalam berbagai lini sel termasuk HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/ Sel 3T3, Sf9, HepG2, dan Hela, dll., dengan efisiensi transfeksi setinggi 80%~90%. Konsentrasi PEI 40K, komponen utama produk ini, adalah 1 mg/mL.

Kirim dengan es basah; Simpan pada suhu -20 , berlaku selama 6 bulan. Atau simpan pada suhu 4 derajat, berlaku selama 3 bulan.

1. Persiapan sebelum transfeksi sel yang melekat (6-well plate, tabel referensi untuk spesifikasi lainnya):

A) Sehari sebelum transfeksi, sel-sel sebaiknya ditanam secara seragam di pelat pori pada suatu

kepadatan yang sesuai untuk mencapai 70 – 85% pada transfeksi formal;

B)Sebelum transfeksi, media sel primer dihilangkan dan dicuci 1-2 kali dengan PBS sebelum mengganti 1,8 mL media dasar tanpa serum atau serum rendah (di bawah 5%), atau Opti-MEM; sel yang berbeda memiliki ketergantungan serum yang berbeda tergantung pada jenis sel tertentu;

C) Sel-sel yang diterapkan ditempatkan di inkubator dan persiapan kompleks transfeksi dimulai.

2. Sel suspensi disiapkan sebelum transfeksi:

A) Pada hari transfeksi, sejumlah sel disentrifugasi untuk menghilangkan media

dan diresuspensi dengan medium basal tanpa serum atau serum rendah (di bawah 5%);

B) Sel suspensi yang telah disiapkan ditempatkan dalam inkubator dan persiapan dimulai

kompleks transfeksi, dan rasio volume antara kompleks transfeksi dan media bisa

dibuat dengan mengacu pada sel yang melekat untuk penyesuaian yang tepat.

3. Kompleks transfeksi disiapkan:

A) Cairan preparasi A: 100 μL media basa bebas serum dan 2 ug DNA plasmid, ditiup dan

campur aduk;

B) Sediaan cairan B : 100 L media basa tanpa serum dan 6-8 μL PEI 40 K Transfeksi

Reagen, peniupan dan pencampuran;

C)Larutan B ditambahkan ke cairan A, ditiup perlahan dan dicampur, dan diinkubasi pada suhu kamar selama

15 menit untuk membentuk kompleks transfeksi DNA-PEI.

4. Sel yang ditransfusikan:

A) Tambahkan kompleks transfeksi yang diperoleh pada langkah sebelumnya ke pelat lubang yang telah diubah sebelumnya

melintasi atau mengelilingi solusi;

B) Kocok pelat "8" atau cara lain agar tercampur sempurna dan diinkubasi dalam inkubator CO2 37 derajat, 5%;

C) Kompleks transfeksi DNA-PEI dengan sel selama 4 – 6 jam menunjukkan efisiensi transfeksi yang lebih baik,

perpanjangan yang tepat atau inkubasi semalaman dan efisiensi transfeksi yang lebih baik.

1. Silakan gunakan sel sehat dalam kondisi baik dan sel pulih dianjurkan untuk dilewatkan minimal 2 kali sebelum transfeksi.

2. Silakan gunakan DNA plasmid berkualitas tinggi, bebas endotoksin.

3. Untuk penggunaan awal, disarankan agar produk dikeluarkan untuk menghindari pembekuan dan pencairan berulang kali.

4. Konsentrasi serum yang tinggi pada saat transfeksi, serta penggunaan antibiotik, dapat mempengaruhi status sel serta efisiensi transfeksi.

5. Toleransi sel yang berbeda, sensitivitas, lamanya waktu inkubasi transfeksi, dan rasio penggunaan PEI/DNA disesuaikan sesuai kebutuhan.

6. Harap kenakan pakaian eksperimental dan sarung tangan sekali pakai saat mengoperasikannya.

Jadwal: Penggunaan transfeksi dalam wadah kultur sel yang berbeda (hanya untuk referensi)

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: reagen transfeksi pei 40k, produsen, pemasok, pabrik reagen transfeksi pei 40k Cina