ER-Pelacak Hijau

ER-Tracker green (Endoplasmic Reticulum Green Fluorescent Probe) adalah kombinasi pewarna fluoresen hijau BODIPY FL dan Glibenclamide. Gugus glibenklamid dalam struktur kimianya, awalnya merupakan obat pengobatan diabetes tipe II, berikatan dengan reseptor sulfonilurea saluran kalium sensitif ATP pada retikulum endoplasma, dan dengan demikian dapat dilokalisasi secara selektif ke retikulum endoplasma dan digunakan sebagai spesifik retikulum endoplasma. probe fluoresen untuk memberi label pada retikulum endoplasma sel. Pelacak ER hijau memiliki spesifisitas yang baik, sangat selektif untuk retikulum endoplasma sel hidup, jarang ternoda mitokondria, dan memiliki sitotoksisitas rendah. Probe ini sebagian dapat mempertahankan karakteristik pewarnaan sel hidup setelah pewarnaan dan fiksasi.

Kirim dengan es kering; Simpan pada suhu -20 derajat dari cahaya selama 12 bulan.

1. Persiapan larutan kerja pengujian:

1.1. Produk ini merupakan larutan penyimpanan 1 mM yang dihangatkan kembali hingga suhu kamar sebelum eksperimen dan disentrifugasi sebentar dengan kecepatan rendah untuk memastikan bahwa reagen tenggelam ke dasar tabung;

1.2. Ini diencerkan menjadi 0.25-1 larutan yang berfungsi μM untuk deteksi retikulum endoplasma dengan buffer (Hanks, PBS, dll., disarankan Hanks) atau media basal (tanpa serum);

2. Pewarnaan sel (protokol berikut ditujukan untuk sel yang melekat; sentrifugasi diperlukan untuk pertukaran sel suspensi)

2.1. Sel normal atau sel yang dirawat dicuci 1-2 kali dengan buffer selama 3-5 menit setiap kali;

2.2. Tambahkan larutan uji retikulum endoplasma yang telah dipanaskan sebelumnya, dan inkubasi dalam inkubator kultur sel pada suhu 37 derajat selama 20 menit (waktu inkubasi dapat disesuaikan sampai batas tertentu karena jenis dan keadaan sel yang berbeda);

2.3. Hapus larutan uji retikulum endoplasma yang berfungsi dan cuci dengan buffer 2-3 kali selama 3-5 menit masing-masing;

2.4. Fluoresensi hijau (Ex=504 nm, Em=511 nm) diamati di bawah mikroskop fluoresensi setelah memblokir film secara langsung atau dengan Media Pemasangan Antipudar (direkomendasikan G1401);

3. Fiksasi sel (opsional):

Catatan: Setelah pewarnaan, produk ini dapat diperbaiki, tetapi sinyal fluoresen akan dilemahkan setelah fiksasi; tidak dapat dilubangi untuk diproses, dan perforasi akan menyebabkan hilangnya label fluoresen.

3.1. Sel-sel yang telah diwarnai dan dicuci ditambahkan ke fiksatif (disarankan G1101) dan difiksasi selama 5 menit pada suhu kamar;

3.2. Hapus bahan pengikat dan cuci dengan buffer 2-3 kali selama 3-5 menit setiap kali;

3.3. Setelah dicuci, sel selanjutnya dapat diblokir, diperiksa secara mikroskopis atau diwarnai lebih lanjut sesuai kebutuhan eksperimental.

Catatan

1. Karena perbedaan jenis dan keadaan sel, konsentrasi kerja pewarna, dan waktu inkubasi, dapat disesuaikan dengan tepat.

2. Probe tidak dapat dilubangi untuk perawatan setelah pewarnaan, dan fluoresensi sel menghilang hampir seluruhnya setelah perforasi.

3. Sifat farmakologis glibenklamid dapat mempengaruhi fungsi tertentu dari retikulum endoplasma; ekspresi variabel reseptor sulfonilurea di beberapa sel khusus juga dapat menyebabkan pewarnaan spesifik retikulum non-endoplasma.

4. Saat mewarnai dan mencuci sel hidup, larutan uji dan buffer pencuci perlu dihangatkan terlebih dahulu pada suhu 37 derajat. Pewarnaan dan pencucian dilakukan dengan inkubasi dalam inkubator agar tidak mempengaruhi morfologi sel akibat rangsangan perbedaan suhu.

5. Untuk mencegah pemadaman fluoresensi, seluruh proses pewarnaan harus dilakukan jauh dari cahaya.

6. Campuran master probe harus disimpan dalam wadah terpisah untuk menghindari pembekuan dan pencairan berulang kali. Untuk menghindari pemborosan, larutan pewarna disiapkan sesuai kebutuhan, siap digunakan..

7. Demi kesehatan dan keselamatan Anda, harap kenakan jas lab dan sarung tangan selama pengoperasian.

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

Tag populer: er-tracker hijau, produsen, pemasok, pabrik er-tracker hijau Cina