Kit Uji Viabilitas Sel Calcein AM（CCK-F）

 

Nama Produk	Kucing. TIDAK	Spesifikasi.
Kit Uji Viabilitas Sel Calcein AM (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM didasarkan pada Calcein (Calcein Acetoxymethyl Ester), dan memperkenalkan gugus asetilmetoksimetil ester (AM), yang tidak hanya menutupi bagian molekul Calcein yang mengkelat kalsium tetapi juga meningkatkan hidrofobisitasnya, sehingga memungkinkan Calcein AM dengan mudah menembus ke dalam membran. sel hidup, dan dicukur oleh esterase seluler endogen menjadi Calcein. Calcein, yang telah kehilangan gugus AM-nya, tidak dapat dengan mudah melewati membran sel dan dengan demikian tertahan di dalam sel; selain itu, bagian molekul kalsium chelated sebagian terbuka, memungkinkan probe Calcein mengikat ion kalsium dalam sel hidup dan memancarkan fluoresensi hijau yang kuat. Namun sel mati kekurangan esterase dan tidak dapat dihidrolisis menjadi Calcein AM, sehingga tidak dapat memberi label pada sel mati. Calcein AM memiliki sitotoksisitas yang rendah dan memiliki sedikit efek pada fungsi seluler, seperti proliferasi sel atau kemotaksis limfosit, menjadikannya probe fluoresen yang sangat baik untuk mewarnai sel hidup.

 

Produk ini, Calcein AM Cell Activity Assay Kit, juga dikenal sebagai Cell Fluorescence Counting Kit (CCK-F), adalah kit pengujian untuk mengevaluasi aktivitas, toksisitas, dan proliferasi sel dengan memberi label pada sel hidup dengan probe fluoresen Calcein AM. Kit ini telah dioptimalkan dan disetel, tidak hanya memiliki sensitivitas deteksi yang tinggi dan jangkauan linier yang luas, tetapi juga hanya memerlukan waktu inkubasi yang singkat untuk menyelesaikan deteksi sel. Mudah dioperasikan dan tidak memerlukan pelabelan radioisotop atau langkah-langkah seperti kristalisasi dan pembubaran, yang dapat mengurangi kesalahan yang disebabkan oleh operasi eksperimental dan meningkatkan akurasi dan reproduktifitas.

 

 

Kirim dengan es basah; simpan pada suhu -20 dalam gelap.; Cobalah untuk menghindari pembekuan dan pencairan berulang kali, berlaku selama 12 bulan.

 

 

Nomor Komponen	Komponen	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Solusi Calcein AM	100 μL	500 μL
G1609-2	Penyangga Uji CCK-F	10 ml	50ml
petunjuk		Satu salinan

 

 

1. Persiapan larutan kerja Calcein AM

Untuk 96-pelat kultur sel sumur, gunakan 100ul larutan calcein AM per sumur. Siapkan larutan kerja calcein AM dalam jumlah yang sesuai seperti yang ditunjukkan pada tabel berikut dan aduk hingga rata.

 

Komponen	10 tes	50 tes	100 tes
Solusi Calcein AM	10 μL	50 μL	100 μL
Penyangga Uji CCK-F	1 ml	5ml	10 ml

 

2. Deteksi sel yang melekat:

Langkah-langkah berikut ini sesuai dengan 96-skema deteksi pelat sumur, dan sistem pelat muti-sumur lainnya perlu disesuaikan dengan situasi.

A. Penyemaian sel: sel disemai secara merata dalam 96-piringan sumur dengan kepadatan tertentu, dan diberi obat atau perlakuan awal lainnya (kepadatan penyemaian ditentukan oleh faktor-faktor seperti ukuran sel, laju pertumbuhan, dll.);

B. (Opsional) Pencucian sel: Keluarkan media kultur dan cuci sel satu hingga dua kali dengan PBS (direkomendasikan G4202) untuk menghilangkan serum, fenol merah, dan/atau obat yang mengganggu pengujian.

C. Pelabelan probe: Setelah menghilangkan media kultur sel atau buffer PBS, tambahkan 100 μL larutan kerja calcein AM dan inkubasi pada suhu 37 derajat selama 30 menit dalam gelap.

D. (Opsional) Inkubasi sel: Lanjutkan inkubasi selama 15-30 menit dengan media kultur sel baru untuk memastikan Calcein AM intraseluler terhidrolisis sepenuhnya.

e. Deteksi fluoresensi: Setelah inkubasi, ukur fluoresensi dengan pembaca pelat mikro fluoresensi (panjang gelombang eksitasi maksimum probe Calcein AM adalah 501 nm, dan panjang gelombang emisi maksimum adalah 521 nm.) dan hitung viabilitas sel. Intensitas fluoresensi sebanding dengan jumlah sel yang hidup. Mikroskop fluoresensi juga dapat digunakan untuk mengamati hasil pewarnaan.

3. Uji sel suspensi:

A. Penyemaian sel: sel disemai secara merata dalam 24-piringan sumur dengan kepadatan tertentu, dan diberi obat atau perlakuan awal lainnya (kepadatan penyemaian ditentukan oleh faktor-faktor seperti ukuran sel, kecepatan pertumbuhan, dll.);

B. (Opsional) Pencucian sel: Centrifuge kultur sel pada 1,000×g selama 3-5 menit, buang supernatan dan cuci sel dua kali dengan PBS untuk menghilangkan serum, fenol merah dan/atau obat yang mengganggu proses pengujian.

C. Pelabelan probe: Setelah disentrifugasi pada 1000 g selama 3-5 menit, keluarkan media kultur sel atau buffer PBS, tambahkan larutan kerja Calcein AM dalam jumlah yang sesuai, dan inkubasi pada suhu 37 derajat selama 30 menit dalam gelap;

D. (Opsional) Inkubasi sel: Lanjutkan inkubasi selama 15-30 menit dengan media kultur sel baru untuk memastikan Calcein AM intraseluler terhidrolisis sepenuhnya.

e. Deteksi fluoresensi: Setelah inkubasi, ukur fluoresensi dengan pembaca pelat mikro fluoresensi atau sitometri aliran (panjang gelombang eksitasi maksimum probe Calcein AM adalah 501 nm, dan panjang gelombang emisi maksimum adalah 521 nm.). Viabilitas sel sebanding dengan intensitas fluoresensi. Bergantung pada tujuan percobaan, inti juga dapat diimbangi atau dideteksi lebih lanjut dengan instrumen lain seperti mikroskop fluoresensi.

 

 

1. Sentrifugasi sebentar larutan Calcein AM sebelum digunakan untuk mengurangi kehilangan reagen.

2. Calcein AM mudah terurai di lingkungan lembab. Aliquot setelah diterima, segel rapat, dan simpan pada suhu -20 derajat .

3. Calcein AM tidak stabil dalam larutan air. Solusi kerja Calcein AM siap digunakan dan valid untuk digunakan dalam waktu 24 jam.

4. Waktu inkubasi optimal berbeda-beda untuk jenis sel yang berbeda, yang dapat disesuaikan dan dioptimalkan berdasarkan hasil pewarnaan.

5. Gunakan pelat multi-sumur hitam untuk menumbuhkan sel ketika pembaca pelat mikro fluoresensi digunakan untuk pengukuran.

6. Pewarna fluoresen harus didinginkan, ditangani dan disimpan jauh dari cahaya.

7. Demi keselamatan dan kesehatan Anda, mohon kenakan kacamata pengaman, sarung tangan, atau pakaian pelindung.

 

Hanya Untuk Penggunaan Penelitian!

 

 

Tag populer: kit uji viabilitas sel calcein am （cck-f）, Cina kit uji viabilitas sel calcein am （cck-f） produsen, pemasok, pabrik